逆轉錄酶（AMV）使用說明

反轉錄酶(reverse transcriptase,也可寫成逆轉錄酶) 又稱為依賴RNA 的DNA 聚合酶。1970 年Temin 等在致癌RNA 病毒中發現了一種特殊的DNA 聚合酶，該酶以RNA 為模板，以dNTP 為底物，tRNA( 主要是色氨酸tRNA) 為引物，在tRNA 3'-OH 末端上，根據堿基配對的原則，按5'-3'方向合成一條與RNA 模板互補的DNA 單鏈，這條DNA 單鏈叫做互補DNA (complementary DNA，CDNA)。

反轉錄酶（Reverse transcriptase）是以RNA為模板指導三磷酸脫氧核苷酸合成互補DNA（cDNA）的酶。哺乳類C型病毒的反轉錄酶和鼠類B型病毒的反轉錄酶都是一條多肽鏈。鳥類RNA病毒的反轉錄酶則由兩上亞基結構。真核生物中也都分離出具有不同結構的反轉錄酶。

AMV是一種逆轉錄酶的名稱。amv逆轉錄酶分離自禽類成髓細胞瘤病毒，其方法由houts等人的方法改進而來。分離得到的酶是分子量為157kd的αβ全酶。amv逆轉錄酶經高度純化，*無核酸酶污染。amv逆轉錄酶可用于cdna合成，也可用于rna和dna的雙脫氧測序。amv逆轉錄酶以總rnd或polya+rnd為模板，具有以rna為模板的dna聚合酶活性，dna為模板的dna聚合酶活性和rnaseh酶活性，

AMV逆轉錄酶

適反應溫度在42-55℃，高可達60℃，如果使用焦磷酸鈉，適溫度為37-41℃。rtt反應緩沖液根據不同用途可以作為5x或10x反應液使用，同時可抑制rnaseh酶活性。按照標準使用方法可以得到長至10-12kbcdna。rt007amv逆轉錄酶比普通amv逆轉錄酶和mmlv逆轉錄酶能耐受更高的溫度和合成更長的cdna。

基本資料

編輯

反應溫度：42-60℃產物長度：10-12kb

來源：禽畜源，全酶

反應效率：5u/reaction

rnaseh活性：弱，被抑制

特點

編輯

1．高靈敏度2、高得率

3．高達60℃的反應溫度可有效打開rna二級結構

4．可合成長至10-12kb的cdna

5．rt反應液可適用不同用途

逆轉錄酶（AMV）使用方法

solarbio逆轉錄酶

貨號：RT1060
規格：200U/500U/1000U
保存:-20℃保存，避免反復凍融，保質期為2年。
產品內容

產品簡介：
逆轉錄酶（AMV）從AvianMyeloblastosisVirus分離出來，經過高度純化，不含核酸酶。可用于合成一鏈cDNA、制作cDNA探針、RNA轉錄、測序和RNA的逆轉錄反應。

逆轉錄酶（AMV）一個活性單位U定義為：在37℃，10min條件下，使1nmol的脫氧核糖核酸摻入酸性沉淀物質所需的酶量。

使用說明：
合成一鏈cDNA的步驟
以下試劑客戶自己提供
dNTPs(10mM)

引物（OligodT（18）或隨機引物或特異性引物

無核酸酶雙蒸水
RNA模板
RNase抑制劑

RT反應（20μl體系）：
1．使用前每個組份輕輕混勻，然后2000rpm離心20s；
2．取滅過菌且無核酸酶的0.2mlPCR管，依次加入

2~5μgRNAXμl
引物*1μl

引物*：OligodT18(10μM)或隨機引物(50ng/μl)或特異性引物(2μM)】
dNTPs(10mM)1μl
補加無核酸酶的雙蒸水至總體積15.5μl

3. 65度保溫 5min 然后冰浴5min;

4.往步驟3的pcr管中依次加入下列組份

RNase 抑制劑（40u/ul）    0.5ul

10*AMV reaction buffer   2ul

DTT  (200mm)  1ul

逆轉錄酶（AMV）     1UL

5.輕輕混勻后，然后2000rpm離心20s

6. 現在42度保溫1hr ,然后70度保溫15min,

7.上述產物可立即進行下一步的pcr反應或-20度保存。

AMV 逆轉錄酶

LifeSci AMV 逆轉錄酶
一、公司介紹
Life Sciences Advanced Technologies 成立于1975年，是世界上一家生產AMV反轉錄酶的廠商。LSAT的AMV反轉錄酶因為其高靈敏度和有競爭力的價格體系，已經被許多世界有名的測序公司用于他們的反轉錄試劑盒產品。
Life Sciences Advanced Technologies在分子診斷試劑和酶類的開發研究上處于世界*地位。
Life Sciences Advanced Technologies決心在兩個方面幫助人類疾病的診斷：提供應用基因測序診斷慢性復雜疾病的反轉錄試劑盒里的AMV反轉錄酶和傳染病現場診斷的NASBA試劑盒。
 
二、產品推薦
1. RTHSA34
產品描述：
作為CDNA文庫構建試劑盒的配套產品用于基因測序，濃度為35,000 U/ml。該款反轉錄酶已經被位居世界前三的的一家測序公司用于他們的反轉錄試劑盒，可實現17.5 U / cDNA逆轉錄和低于1 ng的RNA序列轉錄。
產品優勢：
•僅需要0.5ul的酶對于每個cDNA文庫試劑盒，有效控制反應體系，用于后續的擴增等
•每個cDNA文庫試劑盒只需要17.5U, 相對于其他使用200單位的逆轉錄酶，可以節省50%以上的成本。
• amv 效率是Invitrogen superscriptase (一款MMLV 反轉錄酶)的11倍，是NEB和Promega 同款AMV的4倍。
2.AMV 007
產品描述：
主要應用于RT-PCR反應的AMV反轉錄酶，已廣泛應用于許多生物技術實驗室，濃度是20,000 U/ml。終端用戶使用2.5 U 就能完成一個RT-PCR反應。
產品優勢：
•用2.5U就能完成一個反應，有些中國用戶，將其20000單位/ml的產品稀釋到5000 U /ml，這樣客戶使用0.5 ul 就能完成一個RT-PCR反應。
•一個RT - pcr反應只需要2.5 U，相比NEB和Promega 的AMV RT，可以節省75%的成本。
3. BRT121
產品描述：
作為一種低無機磷酸鹽的反轉錄酶，適用于進行下游克隆過程中的CDNA合成，因為一般情況下較高的無機磷酸鹽濃度對磷酸轉移反應有抑制作用。常用的可選濃度為5,000 Units/mL。