biochain Z7030031用戶手冊和說明

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小鼠內皮祖細胞體外生長

產品編號：Z7030031

介紹

內皮祖細胞（epc）是內皮細胞系中的一種原始細胞類型。它們是骨髓來源的細胞，具有類似于胚胎血管母細胞的特性。這些祖細胞遷移到血液中，能夠分化成各種成熟的血管內皮細胞類型。

epc在血管生成和血管生成中起著重要作用。近的證據表明

epc在腫瘤生長和轉移中的作用。epc數目的改變與淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、lewis肺癌和肝細胞癌（hcc）有關。在各種疾病的發(fā)病機制中，包括冠狀動脈疾病（cad）、缺血、肺動脈高壓、腦血管疾病、急性心肌梗死、糖尿病、關節(jié)炎和傷口愈合中，epc的數量和功能也發(fā)生了變化。此外，epc對衰老和吸煙相關疾病有影響，提示epc在這些領域有潛在的應用。

epoc的規(guī)范與表征

從7-8周齡c57/bl6小鼠骨髓中分離出生物鏈小鼠內皮生長細胞（mepoc），并進行體外培養(yǎng)。我們的mepoc產品在第9-10次傳代時作為冷凍保存或增殖細胞交付。該細胞被認為是晚期epc，因為它是cd 133-。每個冷凍瓶在1毫升冷凍培養(yǎng)基中含有大于5 x 10 ⁵細胞。我們的mepocs具有與內皮祖細胞相同的紡錘狀形態(tài)。

保管部

對于冷凍保存的細胞，在接收時立即將細胞從干冰轉移到液氮中，并將細胞保存在液氮中，直到需要進行細胞培養(yǎng)進行實驗。

航運

冷凍保存的細胞在干冰上運輸；增殖細胞在室溫下運輸。

epoc培養(yǎng)說明

一、MEPOC生長培養(yǎng)基的制備

我們推薦使用Biochain的MEPOC生長培養(yǎng)基（CAT Z7030033）培養(yǎng)我們的MEPC。

一。在室溫水浴中解凍MEPOC生長介質補充劑（CAT Z7030034）。

2.在Mepoc基本培養(yǎng)基（CAT Z7030035）的瓶子（500 ml）中加入整個體積（25 ml）的EPOC生長培養(yǎng)基補充劑，制備Mepoc生長培養(yǎng)基。生物鏈的mepoc生長培養(yǎng)基不含抗生素，但如果擔心污染，可以在培養(yǎng)基中添加抗生素。

三。使用前，在37°C水浴中加熱部分mepoc生長介質。

二。解凍冷凍細胞

一。在37°C水浴中加熱EPOC生長培養(yǎng)基。

2.用70%乙醇擦拭冰凍小瓶的外部。在37°C的水浴中快速解凍冷凍細胞。

三。將細胞懸液無菌轉移到15ml試管中。用1毫升生長培養(yǎng)基沖洗小瓶，并在15毫升試管中與細胞混合。以170克（或1400轉/分）的速度離心5分鐘，使細胞沉淀。除去上清液。加入5ml新鮮小鼠epc培養(yǎng)基，置于t25燒瓶中。

四。在37℃下，用5%的二氧化碳和95%的空氣在加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細胞。每隔一天換一次。健康的培養(yǎng)物顯示紡錘體形態(tài)，培養(yǎng)2-3天后細胞數量應加倍。

三、亞培養(yǎng)細胞

一。當細胞達到100%匯合時進行繼代培養(yǎng)。

2.在通過細胞前一天更換培養(yǎng)基。

三。在37°C水浴中加熱Dulbecco的PBS、0.05%胰蛋白酶/EDTA和MEPOC生長培養(yǎng)基。

四。用Dulbecco的PBS沖洗細胞。

5個。用胰蛋白酶/EDTA溶液（1.5毫升/25平方厘米）培養(yǎng)細胞3-5分鐘，直到大約90%的細胞開始分離。輕輕地填充血管使細胞分離。

6.加入相當于胰蛋白酶/EDTA體積1/10的胎牛血清中和胰蛋白酶，輕輕搖動培養(yǎng)管混合。

7號。輕輕地重新懸浮細胞，并將細胞轉移到15ml錐形管中。

8個。在室溫下將細胞懸液在170 x g下離心5分鐘。

9號。小心地去除上清液，不要干擾細胞顆粒。在生長培養(yǎng)基中重新懸浮細胞。

10個。將它們按1:5的比例放入新的培養(yǎng)皿中。

11號。在37℃下，用5%的二氧化碳和95%的空氣在加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細胞。每隔一天換一次。

iv.在充滿mepoc生長培養(yǎng)基的t25、t75、t125和t225燒瓶中提供增殖性epoc增殖性epoc。

當燒瓶到達時：

一。從燒瓶中倒出大部分培養(yǎng)基，并在燒瓶中留適量。

2.在37℃下，用5%的二氧化碳和95%的空氣在加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細胞。第二天換成中號，以后每隔一天換一次。健康的培養(yǎng)基在培養(yǎng)2-3天后，紡錘形細胞形態(tài)和細胞數量應加倍。

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References

1. Asahara T, Murohara T, Sullivan A, Silver M, van der Zee R, Li T, Witzenbichler B, Schatteman G and Isner JM (1997). Isolation of putative progenitor endothelial cells for angiogenesis. Science. 275:964-967.

2. Gupta M (2007). Circulating endothelial cells and circulating endothelial cell progenitors as surrogate markers for determining response to antiangiogenic agents. Clin Colorectal Cancer 6(5):337-338.

3. Gao D, Nolan DJ, Mellick AS, Bambino K, McDonnell K, Mittal V. Endothelial progenitor cells control the angiogenic switch in mouse lung metastasis. Science. 2008 Jan 11; 319(5860):195-8.