genebridges K001說明書

Quick & Easy BAC Modification Kit

快速簡便的BAC修改套件

• ID: K001

特征

• 快速可靠地克隆大DNA分子

• 在選擇的位置進行的DNA修飾

• 獨立于限制網站

• 沒有尺寸限制

應用

• 簡單的BAC修飾，如插入選擇標記，刪除帶有選擇標記基因的片段，插入功能片段和選擇標記基因

• 該試劑盒也可用于細菌染色體修飾

描述

該試劑盒旨在通過革命性的Red / ET重組技術對BAC進行修飾 - 這是一種*的工具，可在2周內將修飾（如插入和缺失）引入任何類型的BAC。

紅/ ET重組使用體內重組和校對活動來小化構建體中不需要的突變。套件中包含了修改BAC所需的所有必要內容以及執行控制實驗所需的所有材料，旨在讓您熟悉這種新技術。另外，轉化任何大腸桿菌的載體提供了用于應用Red / ET重組的感受態菌株的菌株。pSC101-BAD-gbaAtet帶有四環素抗性盒。該盒含有溫度敏感的復制起點（ori），只能在30°C繁殖 - 在37°C時質粒會丟失。這允許在不再需要質粒時簡單地去除質粒。為了引入突變（即選擇盒，如該試劑盒中包含的新霉素抗性盒），首先必須將同源序列引入選擇盒。這可以通過簡單的PCR反應來完成。這些短的同源序列（每個50nt）可以根據您的實驗需要自由選擇。只需選擇要修飾的位置，并使用Red / ET重組技術將選擇盒直接插入所需的核苷酸。然后需要用誘導的Red / ET重組系統在細菌中電穿孔PCR產物。在成功進行Red / ET重組后，可以使用常規DNA微量制備方法回收修飾的DNA。

內容

• pSC101-BAD-gbaA（tet）是基于Red / ET表達質粒的pSC101 ori（溫度敏感起源）的衍生物

• 攜帶pSC101-BAD-gbaA（tet）的BAC宿主

• 用于修飾150kb BAC的陽性對照實驗（攜帶pSC101-BAD-gbaA的宿主中的BAC克隆，用于在BAC骨架中缺失的新PCR產物，在宿主中作為陽性重組體的BAC-neo克隆）

• 方案，質粒描述，寡核苷酸圖譜和序列

Sequences

Tn5-kan^R/neo^R selection cassette

Tn5-promoter  kan^R/neo^R

TGGACAGCAAGCGAACCGGAATTGCCAGCTGGGGCGCCCTCTGGTAAGGTTGGGA AGCCCTGCAAAGTAAACTGGATGGCTTTCTTGCCGCCAAGGATCTGATGGCGCAG GGGATCAAGATCTGATCAAGAGACAGGATGAGGATCGTTTCGCATGATTGAACAA GATGGATTGCACGCAGGTTCTCCGGCCGCTTGGGTGGAGAGGCTATTCGGCTATG ACTGGGCACAACAGACAATCGGCTGCTCTGATGCCGCCGTGTTCCGGCTGTCAGC GCAGGGGCGCCCGGTTCTTTTTGTCAAGACCGACCTGTCCGGTGCCCTGAATGAA CTGCAGGACGAGGCAGCGCGGCTATCGTGGCTGGCCACGACGGGCGTTCCTTGCG CAGCTGTGCTCGACGTTGTCACTGAAGCGGGAAGGGACTGGCTGCTATTGGGCGA AGTGCCGGGGCAGGATCTCCTGTCATCTCACCTTGCTCCTGCCGAGAAAGTATCC ATCATGGCTGATGCAATGCGGCGGCTGCATACGCTTGATCCGGCTACCTGCCCAT TCGACCACCAAGCGAAACATCGCATCGAGCGAGCACGTACTCGGATGGAAGCCGG TCTTGTCGATCAGGATGATCTGGACGAAGAGCATCAGGGGCTCGCGCCAGCCGAA CTGTTCGCCAGGCTCAAGGCGCGCATGCCCGACGGCGAGGATCTCGTCGTGACCC ATGGCGATGCCTGCTTGCCGAATATCATGGTGGAAAATGGCCGCTTTTCTGGATT CATCGACTGTGGCCGGCTGGGTGTGGCGGACCGCTATCAGGACATAGCGTTGGCT ACCCGTGATATTGCTGAAGAGCTTGGCGGCGAATGGGCTGACCGCTTCCTCGTGC TTTACGGTATCGCCGCTCCCGATTCGCAGCGCATCGCCTTCTATCGCCTTCTTGA

CGAGTTCTTCTGACTCGAG